2023 Autor: Jake Johnson | [email protected]. Zadnja izmjena: 2023-05-24 23:12
kolonska hromatografija je možda najopštija metoda koja se koristi za odvajanje, kao i za prečišćavanje, različitih organskih jedinjenja koja su u čvrstom ili tečnom stanju.
U ovoj vrsti hromatografije, stacionarna faza koja se koristi, odnosno absorbent, nalazi se unutar staklene kolone, koja se završava zapornom slavinom za kontrolu prolaska supstanci na vanjsku stranu kolone. Stacionarna faza je impregnirana eluantom ili mobilnom fazom. Zatim organsku smjesu koju želimo odvojiti odlažemo na vrh stacionarne faze i tako mobilna faza može proći kroz sistem.
Jedinjenja koja su otopljena u mobilnoj fazi, postepeno će izlaziti iz hromatografske kolone i sakupljati se u frakcijama. Manje polarne frakcije, koje su općenito one s malo ili nimalo zadržavanja u apsorbentu, prve će napustiti kolonu. S druge strane, polarnije supstance se duže zadržavaju u apsorbentu, te je često potrebno koristiti različite rastvarače kako bi se povećao njihov polaritet tako da ih oni vuku.
Vrijeme potrebno za protok jedinjenja kroz kolonu poznato je kao vrijeme zadržavanja. Ovo vrijeme varira i karakteristično je za svako jedinjenje pod određenim uslovima.određene hromatografske varijable, koje variraju ovisno o korištenom apsorbentu, rastvaraču, pritisku, prečniku korištene kolone, itd.
Najčešće korišteni apsorbent za kolonsku hromatografiju je silika gel. Ponekad se umjesto silika gela, kada je nekompatibilan sa smjesom koja se hromatografira, koristi glinica ili florisil (magnezijum silikat). Kromatografija na koloni se može izvesti gravitacijom ili srednjim pritiskom. Kada se izvodi na srednjem pritisku, glava kolone je povezana na kompresor ili vod komprimovanog vazduha.
Veličina čestica silika gela za hromatografiju srednjeg pritiska treba da bude manja od one za gravitacionu hromatografiju. Kada bismo u gravitacionoj hromatografiji koristili silika gel sa manjom veličinom čestica, ne bi došlo do eluiranja, jer bi protok rastvarača bio otežan. Ali umjesto toga, ako izvršimo pritisak, onda bi zbog sile došlo do eluiranja rastvaračem.
Zbog smanjenja veličine upijajućih čestica dolazi do efikasnijeg odvajanja. Uopšteno govoreći, hromatografija srednjeg pritiska daje bolje rezultate od gravitacione hromatografije, a takođe, budući da je brža, najčešće se koristi.
Kada ćemo obaviti kolonsku hromatografiju, prvo što moramo učiniti je odabrati odgovarajući rastvarač za naš slučaj, kako bismo optimizirali razdvajanje komponenti smjese. Ova operacija se odvija krozanalitička tankoslojna hromatografija. Najuticajnija varijanta na efikasnost razdvajanja hromatografije srednjeg pritiska sa silika gelom je prečnik kolone, kao i količina upotrebljenog gela.
Da bi se izabrao rastvarač, prvo se vrši tankoslojna hromatografija uzorka koji se analizira. Rastvarač treba da proizvede dobro razdvajanje komponenti smeše na ploči, postavljajući manje polarnu komponentu na Rf blizu 0,3. Za male kolone idealno je koristiti manje polarni eluent od onog koji je postignut rezultatom pločaste hromatografije.
Ponekad se koriste mješavine rastvarača i radi se gradijentno eluiranje. Za to, kromatografija počinje mješavinom otapala odgovarajućeg polariteta kako bi se mogla odvojiti komponenta koja ima najveći Rf, i tako će se, kada se prikupi, polaritet malo po malo povećavati kako bi se mogle odvojiti polarnije komponente. Ako se pri započinjanju hromatografije koristi pretjerano polaran rastvarač, komponente smjese će zajedno eluirati, što bi dovelo do odvajanja. Jedna od najčešće korištenih mješavina rastvarača je heksan/etil acetat.
